Multipleks Satu Langkah RT-qPCR Premix-UNG
Nomor Kucing: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) adalah kit PCR kuantitatif multipleks berdasarkan RNA sebagai templat.Selama proses percobaan, transkripsi balik dan PCR kuantitatif dilakukan dalam tabung yang sama, yang menyederhanakan operasi percobaan dan mengurangi risiko kontaminasi.Dalam kit ini, cDNA untai pertama disintesis secara efisien oleh Reverse Transcriptase yang tahan panas dan diamplifikasi secara kuantitatif oleh HotStart Tag DNA Polymerase.Kit ini terutama berisi buffer MP yang dioptimalkan, campuran enzim, dll. Larutan buffer sudah mengandung Mg2+dan dNTP.Selain itu, ditambahkan faktor-faktor yang secara efektif dapat menghambat amplifikasi PCR non-spesifik dan meningkatkan efisiensi amplifikasi beberapa reaksi qPCR, yang dapat memastikan efisiensi amplifikasi dan melaksanakan hingga beberapa reaksi amplifikasi.Sistem dUTP/UDG ditambahkan untuk secara efektif mencegah risiko kontaminasi aerosol.
Komponen
1. Penyangga
2. Campuran Enzim
Spesifikasi
| Mulai Panas | Start panas bawaan |
| Metode deteksi | Deteksi probe primer |
| metode PCR | RT-qPCR satu langkah |
| Polimerase | Taq DNA polimerase |
| Jenis sampel | DNA |
Kondisi penyimpanan
Produk dikirim dengan es kering dan dapat disimpan pada suhu -25~-15℃ selama 1 tahun.Ini harus sering dihindaribeku-cair.Disarankan untuk menyimpan secara terpisah.
instruksi
1.Reaksi Sistem
| Komponen | Volume (µL) | Konsentrasi Akhir |
| 2 × MP Penyangga | 12.5 | 1× |
| Campuran Enzim | 1 | - |
| Campuran Primer/Probe (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Templat RNA | 1-10 | - |
| H2O Bebas RNase | sampai 25 | - |
Catatan:
Pastikan tercampur rata sebelum digunakan, hindari gelembung berlebihan yang disebabkan oleh getaran keras.
A.Konsentrasi primer: Campuran primer termasuk primer multipleks, tergantung situasinya, konsentrasi primer optimal mungkin antara 0,l dan 1,0μM.
B.Konsentrasi probe: Campuran probe termasuk kelompok fluoresen pelabelan probe multipleks, tergantung pada situasi, konsentrasi probe optimal mungkin antara 0,05 dan 0,5μM.
C.Pengenceran templat: qPCR sangat sensitif dan disarankan untuk mengencerkan templat.Nilai kontrol Ct cocok antara 20 dan 35.
D.Persiapan sistem: Harap persiapkan di meja kerja yang sangat bersih, dan pipettor serta tabung reaksi tanpa residu nuklease;disarankan untuk menggunakan kepala pistol dengan elemen filter.Hindari kontaminasi silang dan kontaminasi aerosol.
2. Bersepeda yang DioptimalkanProtokol
| Siklus melangkah | Suhu. | Waktu | Siklus |
| Membalikkan transkripsi | 50℃A | 20 menit | 1 |
| Denaturasi awal | 95℃ | 5 menit | 1 |
| Reaksi amplifikasi | 95℃ | 15 detik |
40-45 |
| 60℃ b | 30 detik c |
Catatan:
A.Transkripsi terbalik: Suhu dapat memilih 42°C atau 50°C.
B.Reaksi amplifikasi: Suhu disesuaikan dengan nilai Tm primer yang dirancang.
C.Akuisisi sinyal fluoresensi: Silakan atur prosedur eksperimental sesuai dengan persyaratan manual instrumen.
Catatan
Harap kenakan APD yang diperlukan, seperti jas lab dan sarung tangan, untuk memastikan kesehatan dan keselamatan Anda.
