2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Nomor Kucing: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) dirancang untuk melakukan PCR langsung dari sampel tanpa ekstraksi DNA atau persiapan sampel.Reagen ini terdiri dari DNA polimerase hot-start, DNA urasil glikosilase (UNG), Inhibitor RNase, MgCl2, dNTPs (dengan dUTP, bukan dTTP), dan stabilisator, untuk PCR kuantitatif (qPCR).Reagen ini memiliki toleransi inhibitor yang tinggi, sehingga dapat langsung diterapkan pada deteksi sampel seperti usap tenggorokan, air liur, darah utuh anti-koagulasi, plasma, dan serum tanpa ekstraksi DNA.Reagen ini menggunakan buffer eksklusif untuk qPCR dengan campuran enzim DNA polimerase anti-inhibitor dan enzim UNG.Oleh karena itu, dapat diperoleh amplifikasi gen target yang baik pada sampel yang mengandung inhibitor dan menghambat amplifikasi positif palsu yang disebabkan oleh residu PCR dan polusi aerosol.Reagen ini kompatibel dengan sebagian besar instrumen PCR kuantitatif fluoresen, seperti Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche, dan sebagainya.
Komponen
1. Enzim 50×SensiDirect/Campuran UNG
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Kondisi penyimpanan
Semua komponen harus disimpan pada suhu -20℃ untuk penyimpanan jangka panjang dan 4℃ hingga 3 bulan.Harap aduk rata setelah dicairkan dan sentrifugasi sebelum digunakan.Hindari sering membekukan-mencair.
Protokol Bersepeda
| Melangkah | Suhu | Waktu | Siklus |
| Pencernaan | 50℃ | 2 menit | 1 |
| Aktivasi polimerase | 95℃ | 1-5 menit | 1 |
| Mengubah sifat sesuatu benda | 95℃ | 10-20 detik | 40-50 |
| Anil/Ekstensi | 56-64℃ | 20-60an |
Petunjuk Pemipetan
| Reagen | Volume per reaksi | Volume per reaksi | Konsentrasi Akhir |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzim/UNG Campuran | 0,5µL | 1µL | 1× |
| Campuran Probe Primer 25×1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Sampel3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| jumlah seluruhnya | 25 μL | 50 μL | - |
1. Konsentrasi akhir primer biasanya 0,2μM.Untuk hasil yang lebih baik, konsentrasi primer dapat dioptimalkan dalam kisaran 0,2-1μM.
2. Umumnya, konsentrasi probe dapat dioptimalkan dalam kisaran 0,1-0,3μM.Konsentrasi probe yang optimal berkaitan dengan instrumen amplifikasi PCR real-time, jenis probe, dan jenis zat pelabelan fluoresen.Silakan merujuk ke manual instrumen atau persyaratan spesifik dari setiap probe fluoresen.
3. Jenis sampel yang berbeda mengandung jenis dan kandungan inhibitor yang berbeda serta jumlah salinan gen target.Volume sampel harus dipertimbangkan berdasarkan kondisi sebenarnya.Lakukan pengenceran sampel dengan menambahkan air bebas nuklease atau TE Buffer, jika perlu.
4. Volume sampel berbeda yang disarankan:
| Sampel | Volume untuk satu 50 μL reaksi | Maksimum perbandingan |
| Darah utuh yang diberi antikoagulan | 2,5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Usap tenggorokan | 10 μL | 20% |
| Air liur | 10 μL | 20% |
Kontrol kualitas
1. Deteksi fungsi: sensitivitas, spesifisitas dan pengulangan qPCR.
2. Tidak ada aktivitas nuklease eksogen: tidak ada polusi endonuklease dan eksonuklease eksogen.
Catatan Produk
1. Produk ini menggunakan jenis baru DNA polimerase hot-start, yang dapat diaktifkan dalam 1-5 menit. Karena buffer reaksinya telah dioptimalkan, produk ini lebih cocok untuk PCR kuantitatif fluoresensi ganda atau ganda menggunakan metode probe.
2. Jika nilai Rn amplifikasi PCR terlalu rendah atau amplifikasi jelas-jelas terhambat, maka penurunan jumlah sampel, peningkatan volume reaksi, atau pengenceran sampel sebelumnya dapat meningkatkan hasil.
3. Pengumpulan darah, air liur, urin, usap tenggorokan, dll. harus mengikuti persyaratan kriteria klinis, dan sampel segar dapat digunakan untuk mencegah degradasi asam nukleat.
4. Karena amplikon yang berbeda memiliki efisiensi pemanfaatan yang berbeda terhadap dUTP dan sensitivitas terhadap UNG, reagen harus dioptimalkan jika sensitivitas deteksi menurun saat menggunakan sistem UNG.Silakan hubungi kami untuk dukungan teknis jika diperlukan.
5. Untuk menghindari amplifikasi sisa produk PCR di antara reaksi satu langkah, diperlukan area eksperimen khusus dan pipet untuk amplifikasi.Operasikan dengan sarung tangan dan ganti sesering mungkin serta jangan membuka tabung reaksi setelah amplifikasi PCR.
