5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
Nomor Kucing: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) adalah campuran berbasis probe satu tabung yang sangat stabil dan cocok untuk transkripsi balik satu langkah dan PCR kuantitatif (qRT-PCR).Ini mendukung pra-pencampuran primer dan probe dan tetap stabil setelah penyimpanan lama pada suhu rendah.Sampel yang akan diuji dapat ditambahkan langsung saat digunakan, tanpa operasi pembukaan/pipet tambahan.Produk ini menyediakan komponen, misalnya DNA polimerase hot-start, M-MLV, DNA urasil glikosilase (TS-UNG) yang labil terhadap panas, Inhibitor RNase, MgCl2, dNTPs (dengan dUTP, bukan dTTP), dan stabilisator.Dengan transkriptase balik amplifikasi cepat dan DNA polimerase yang dimodifikasi secara genetik, amplifikasi PCR dapat diselesaikan dalam waktu 20-40 menit.Reagen ini menggunakan buffer khusus untuk qPCR dengan campuran enzim enzim amplifikasi anti-inhibitor dan enzim UNG.Oleh karena itu, dapat diperoleh amplifikasi gen target yang baik dan mencegah amplifikasi palsu yang disebabkan oleh sisa PCR dan polusi aerosol.Reagen ini kompatibel dengan sebagian besar instrumen PCR kuantitatif fluoresensi dari produsen seperti Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, dan Roche.
Komponen
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Campuran
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Kondisi penyimpanan
Semua komponen harus disimpan pada suhu -20℃ untuk penyimpanan jangka panjang dan 4℃ hingga 3 bulan.Harap aduk rata setelah dicairkan dan sentrifugasi sebelum digunakan.Hindari sering membekukan-mencair.
qRT-PCR Persiapan Sistem Reaksi
| Komponen | 25μLSistem | 50μLSistem | Konsentrasi Akhir |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG Campuran | 1μL | 2μL | 1× |
| Campuran Probe Primer 25×a | 1μL | 2μL | 1× |
| Templat RNAb | – | – | – |
| ddH2O | Hingga 25μL | Hingga 50μL | – |
1) a.Konsentrasi akhir primer biasanya 0,2μM.Untuk hasil yang lebih baik, konsentrasi primer dapat dioptimalkan dalam kisaran 0,2-1μM.Umumnya, konsentrasi probe dapat dioptimalkan dalam kisaran 0,1-0,3μM.
2) b.Saat menggunakan Prosedur PCR cepat, peningkatan konsentrasi primer dan probe dapat menghasilkan hasil amplifikasi yang lebih baik, dan rasionya harus dioptimalkan.
3) Berbagai jenis sampel mengandung berbagai jenis dan kandungan inhibitor serta jumlah salinan gen target.Volume sampel harus dipertimbangkan berdasarkan kondisi sebenarnya.Encerkan sampel dengan air bebas nuklease atau TE Buffer, jika perlu.
ReaksiCketentuan
| Prosedur PCR Reguler | Prosedur PCR Cepat | ||||||
| Prosedur | Suhu. | Waktu | Siklus | Prosedur | Suhu. | Waktu | Siklus |
| Transkripsi Terbalik | 50℃ | 10-20 menit | 1 | Transkripsi Terbalik | 50℃ | 5 menit | 1 |
| Polimerase Pengaktifan | 95℃ | 1-5 menit | 1 | Polimerase Pengaktifan | 95℃ | 30an | 1 |
| Denaturasi | 95℃ | 10-20 detik | 40-50 | Denaturasi | 95℃ | 1-3 detik | 40-50 |
| anil Dan Perpanjangan | 56-64℃ | 20-60an | anil Dan Perpanjangan | 56-64℃ | 3-20 detik | ||
Kontrol kualitas
1.Deteksi fungsi: sensitivitas, spesifisitas dan pengulangan qPCR.
2.Tidak ada aktivitas nuklease eksogen: tidak ada polusi endonuklease dan eksonuklease eksogen.
Catatan
1.Laju amplifikasi DNA polimerase cepat tidak kurang dari 1kb/10s.Instrumen PCR yang berbeda memiliki kecepatan pemanasan dan pendinginan, mode kontrol suhu, dan konduktivitas termal yang berbeda, sehingga optimalisasi konsentrasi primer/probe dan metode pengoperasian yang dikombinasikan dengan instrumen PCR cepat spesifik Anda sangatlah penting.
2.Produk ini memiliki penerapan yang luas, dan cocok untuk diagnosis molekuler dengan sensitivitas tinggi.Metode PCR tiga langkah direkomendasikan untuk primer dengan suhu anil rendah atau untuk amplifikasi fragmen panjang di atas 200 bp.
3.Karena amplikon yang berbeda memiliki efisiensi pemanfaatan dUTP yang berbeda dan sensitivitas yang berbeda terhadap UNG, reagen harus dioptimalkan jika sensitivitas deteksi menurun saat menggunakan sistem UNG.Silakan hubungi kami untuk dukungan teknis jika diperlukan.
4.Untuk menghindari amplifikasi sisa produk PCR, diperlukan area percobaan dan pipet khusus untuk amplifikasi.Operasikan dengan sarung tangan dan ganti sesering mungkin dan jangan membuka tabung PCR setelah amplifikasi.
