Kit Genotipe Tikus

Nomor Kucing: HCR2021A

Produk ini adalah kit yang dirancang untuk identifikasi cepat genotipe tikus, termasuk ekstraksi kasar DNA dan sistem amplifikasi PCR.Produk ini dapat digunakan untuk amplifikasi PCR langsung dari ekor tikus, telinga, jari kaki, dan jaringan lain setelah pembelahan sederhana oleh Lysis Buffer dan Proteinase k.Tidak ada pencernaan semalaman, ekstraksi fenol-kloroform, atau pemurnian kolom, yang sederhana dan mempersingkat waktu percobaan.Produk ini cocok untuk amplifikasi fragmen target hingga 2kb dan reaksi PCR multipleks hingga 3 pasang primer.Campuran PCR Langsung Jaringan Tikus 2× mengandung DNA polimerase hasil rekayasa genetika, Mg²⁺, dNTPs dan sistem buffer yang dioptimalkan untuk memberikan efisiensi amplifikasi dan toleransi inhibitor yang tinggi, sehingga reaksi PCR dapat dilakukan dengan menambahkan templat dan primer serta merehidrasi produk hingga 1×.Produk PCR yang diperkuat dengan produk ini memiliki basis “A” yang menonjol di ujung 3′ dan dapat digunakan langsung untuk kloning TA setelah pemurnian.

Komponen

Kondisi penyimpanan

Produk harus disimpan pada -25~-15℃ selama 2 tahun.Setelah dicairkan, Lysis Buffer dapat disimpan pada suhu 2~8℃ untuk penggunaan berulang kali dalam jangka pendek, dan tercampur rata saat digunakan.

Aplikasi

Produk ini cocok untuk analisis knockout tikus, deteksi transgenik, genotipe, dan sebagainya.

Fitur

1.Operasi sederhana: tidak perlu mengekstraksi DNA genom;

2.Aplikasi luas: cocok untuk amplifikasi langsung berbagai jaringan tikus.

instruksi

1.Pelepasan DNA genom

1) Persiapan lisat

Lisat jaringan dibuat sesuai dengan jumlah sampel tikus yang akan dilisiskan (lisat jaringan harus disiapkan di tempat sesuai dengan dosis dan dicampur secara menyeluruh untuk digunakan), dan proporsi reagen yang diperlukan untuk satu sampel adalah sebagai berikut:

2) Persiapan Sampel dan Lisis

Penggunaan Jaringan yang Direkomendasikan

Ambil sampel jaringan tikus secukupnya dalam tabung sentrifugasi bersih, tambahkan 200μL jaringan lisat segar ke setiap tabung sentrifugasi, vorteks dan kocok, lalu inkubasi pada suhu 55℃ selama 30 menit, lalu panaskan pada suhu 98℃ selama 3 menit.

3) Sentrifugasi

Kocok lisat dengan baik dan sentrifugasi pada 12.000 rpm selama 5 menit.Supernatannya dapat digunakan sebagai template untuk amplifikasi PCR.Jika templat diperlukan untuk penyimpanan, pindahkan supernatan ke tabung sentrifugasi steril lainnya dan simpan pada suhu -20℃ selama 2 minggu.

2.Amplifikasi PCR

Keluarkan 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix dari -20℃ dan cairkan di atas es, aduk terbalik dan siapkan sistem reaksi PCR sesuai tabel berikut (operasikan di atas es):

Catatan:

a) Jumlah yang ditambahkan tidak boleh melebihi 1/10 dari sistem, dan jika ditambahkan terlalu banyak, amplifikasi PCR dapat terhambat.

Kondisi PCR yang Direkomendasikan

Catatan:

a) Suhu anil: Dengan mengacu pada nilai Tm primer, disarankan untuk mengatur suhu anil ke nilai Tm primer yang lebih kecil +3~5℃.

Masalah Umum dan Solusinya

1.Tidak ada strip yang ditargetkan

1) Produk lisis yang berlebihan.Pilih jumlah templat yang paling tepat, biasanya tidak lebih dari 1/10 dari sistem;

2) Ukuran sampel terlalu besar.Encerkan lisat 10 kali dan kemudian perkuat, atau kurangi ukuran sampel dan lisis ulang;

3) Sampel jaringan tidak segar.Disarankan untuk menggunakan sampel jaringan segar;

4) Kualitas primer buruk.Gunakan DNA genom untuk amplifikasi guna memverifikasi kualitas primer dan mengoptimalkan desain primer.

2.Amplifikasi non-spesifik

1) Suhu anil terlalu rendah dan nomor siklus terlalu tinggi.Tingkatkan suhu anil dan kurangi jumlah siklus;

2) Konsentrasi templat terlalu tinggi.Kurangi jumlah templat atau encerkan templat 10 kali setelah amplifikasi;

3) Spesifisitas primer yang buruk.Optimalkan desain primer.

Catatan

1.Untuk menghindari kontaminasi silang antar sampel, beberapa alat pengambilan sampel harus disiapkan, dan permukaan alat dapat dibersihkan dengan larutan natrium hipoklorit 2% atau pembersih asam nukleat setelah setiap pengambilan sampel jika diperlukan penggunaan berulang.

2.Disarankan untuk menggunakan jaringan tikus segar, dan volume pengambilan sampel tidak boleh terlalu besar agar tidak mempengaruhi hasil amplifikasi.

3.Lysis Buffer harus menghindari pembekuan-pencairan yang sering terjadi, dan dapat disimpan pada suhu 2~8℃ untuk penggunaan berulang kali dalam jangka pendek.Jika disimpan pada suhu rendah, dapat terjadi pengendapan, dan harus dilarutkan sepenuhnya sebelum digunakan.

4.Campuran PCR harus menghindari pembekuan-pencairan yang sering, dan dapat disimpan pada suhu 4℃ untuk penggunaan berulang dalam jangka pendek.

5.Produk ini hanya untuk penelitian eksperimental ilmiah dan tidak boleh digunakan dalam diagnosis atau pengobatan klinis.