Kit Ekstraksi DNA/RNA Virus
Kit ini cocok untuk ekstraksi cepat DNA/RNA virus dengan kemurnian tinggi dari sampel seperti usap nasofaring, usap lingkungan, supernatan kultur sel, dan supernatan homogenat jaringan.Kit ini didasarkan pada teknologi pemurnian membran silika yang menghilangkan kebutuhan akan penggunaan pelarut organik fenol/kloroform atau pengendapan alkohol yang memakan waktu untuk mengekstraksi DNA/RNA virus berkualitas tinggi.Asam nukleat yang diperoleh bebas dari pengotor dan siap digunakan dalam eksperimen hilir seperti transkripsi balik, PCR, RT-PCR, PCR waktu nyata, sekuensing generasi berikutnya (NGS), dan Northern blot.
Kondisi penyimpanan
Simpan pada suhu 15 ~ 25℃, dan transportasikan pada suhu kamar
Komponen
| Komponen | 100RXNS |
| Penyangga VL | 50ml |
| Penyangga RW | 120ml |
| ddH2 O bebas RNase | 6ml |
| Kolom RNA FastPure | 100 |
| Tabung Pengumpul (2ml) | 100 |
| Tabung Pengumpul bebas RNase (1 ,5ml) | 100 |
Penyangga VL:Menyediakan lingkungan untuk lisis dan pengikatan.
Penyangga RW:Hapus sisa protein dan kotoran lainnya.
ddH2O bebas RNase:Elusi DNA/RNA dari membran di kolom putar.
Kolom RNA FastPure:Secara khusus menyerap DNA/RNA.
Tabung Pengumpul 2 ml:Kumpulkan filtrat.
Tabung Pengumpul bebas RNase 1,5 ml:Kumpulkan DNA/RNA.
Aplikasi
Usap nasofaring, usap lingkungan, supernatan kultur sel, dan supernatan homogenat jaringan.
Materi yang disiapkan sendirinyata
Ujung pipet bebas RNase, tabung centrifuge bebas RNase 1,5 ml, centrifuge, mixer pusaran, dan pipet.
Proses Percobaan
Lakukan semua langkah berikut dalam lemari keamanan hayati.
1. Tambahkan 200 μl sampel ke dalam tabung sentrifugasi bebas RNase (tambahkan dengan PBS atau NaCl 0,9% jika sampel tidak mencukupi), tambahkan 500 μl Buffer VL, aduk rata dengan cara divorteks selama 15 – 30 detik, dan sentrifugasi sebentar untuk mengumpulkan campuran di bagian bawah tabung.
2. Tempatkan Kolom FastPure RNA dalam Tabung Pengumpul 2 ml.Pindahkan campuran dari Langkah 1 ke Kolom FastPure RNA, sentrifus pada 12.000 rpm (13.400 × g) selama 1 menit, dan buang filtratnya.
3. Tambahkan 600 μl Buffer RW ke Kolom FastPure RNA, sentrifugasi pada 12.000 rpm (13.400 × g) selama 30 detik, dan buang filtratnya.
4. Ulangi Langkah 3.
5. Sentrifugasi kolom kosong pada 12.000 rpm (13.400 × g) selama 2 menit.
6. Pindahkan Kolom FastPure RNA dengan hati-hati ke dalam Tabung Pengumpul bebas RNase baru 1,5 ml (disediakan dalam kit), dan tambahkan 30 – 50 μl ddH2O bebas RNase ke tengah membran tanpa menyentuh kolom.Diamkan pada suhu kamar selama 1 menit dan sentrifugasi pada 12.000 rpm (13.400 × g) selama 1 menit.
7. Buang Kolom FastPure RNA.DNA/RNA dapat digunakan secara langsung untuk pengujian selanjutnya, atau disimpan pada suhu -30~ -15°C untuk waktu singkat atau -85 ~-65°C untuk waktu yang lebih lama.
Catatan
Untuk penggunaan penelitian saja.Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik.
1. Setarakan sampel dengan suhu ruangan terlebih dahulu.
2. Virus sangat menular.Harap pastikan semua tindakan pencegahan keselamatan yang diperlukan dilakukan sebelum percobaan.
3. Hindari pembekuan dan pencairan sampel secara berulang-ulang, karena hal ini dapat menyebabkan degradasi atau berkurangnya hasil DNA/RNA virus yang diekstraksi.
4. Peralatan yang disiapkan sendiri meliputi ujung pipet bebas RNase, tabung centrifuge bebas RNase 1,5 ml, centrifuge, mixer pusaran, dan pipet.
5. Saat menggunakan kit, kenakan jas lab, sarung tangan lateks sekali pakai, dan masker sekali pakai, serta gunakan bahan habis pakai bebas RNase untuk meminimalkan risiko kontaminasi RNase.
6. Lakukan semua langkah pada suhu kamar kecuali ditentukan lain.
Mekanisme & Alur Kerja
