Premix qPCR HIJAU Universal SYBR (Biru)

Nomor Kucing: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Berbasis Pewarna) adalah pra-solusi untuk amplifikasi PCR kuantitatif 2x waktu nyata yang ditandai dengan sensitivitas dan spesifisitas tinggi, berwarna biru, dan memiliki efek penelusuran penambahan sampel.Komponen inti Taq DNA polimerase menggunakan antibodi hot start untuk secara efektif menghambat amplifikasi non-spesifik karena anil primer selama persiapan sampel.Pada saat yang sama, rumus tersebut menambahkan faktor pendorong untuk meningkatkan efisiensi amplifikasi reaksi PCR dan menyamakan amplifikasi gen dengan kandungan GC yang berbeda (30 ~ 70%), sehingga PCR kuantitatif dapat memperoleh hubungan linier yang baik dalam skala kuantitatif yang luas. wilayah.Produk ini mengandung Pewarna Referensi Pasif ROX khusus, yang dapat diterapkan pada sebagian besar instrumen qPCR.Tidak perlu mengatur konsentrasi ROX pada instrumen yang berbeda.Anda hanya perlu menambahkan primer dan templat untuk menyiapkan sistem reaksi untuk amplifikasi.

Komponen

Campuran Master qPCR Biru Universal

Kondisi penyimpanan

Produk dikirim dengan kantong es dan dapat disimpan pada -25℃~-15℃ selama 18 bulan.Penyinaran cahaya yang kuat harus dihindari saat menyimpan atau menyiapkan sistem reaksi.

Spesifikasi

instruksi

1.Sistem Reaksi

[Catatan]: Aduk rata sebelum digunakan untuk menghindari gelembung berlebihan akibat guncangan yang kuat.

a) Konsentrasi primer: Konsentrasi primer akhir adalah 0,2μmol/L, dan juga dapat disesuaikan antara 0,1 dan 1,0μmol/L jika diperlukan.

b) Konsentrasi templat: Jika templat adalah larutan stok cDNA murni, volume yang digunakan tidak boleh melebihi 1/10 dari total volume reaksi qPCR.

c) Pengenceran templat: Disarankan untuk mengencerkan larutan stok cDNA sebanyak 5-10 kali.Jumlah penambahan template yang optimal akan lebih baik bila nilai Ct yang diperoleh dengan amplifikasi adalah 20-30 siklus.

d) Sistem reaksi: Disarankan untuk menggunakan 20μL atau 50μL untuk memastikan efektivitas dan pengulangan amplifikasi gen target.

e) Persiapan sistem: Harap persiapkan di bangku super bersih dan gunakan ujung dan tabung reaksi tanpa residu nuklease;disarankan untuk menggunakan tip dengan kartrid filter.Hindari kontaminasi silang dan kontaminasi aerosol.

2.Program reaksi

Program Standar

Program Cepat

[Catatan]: Program cepat cocok untuk sebagian besar gen, dan program standar dapat dicoba untuk gen struktur sekunder kompleks individu.

a) Suhu dan waktu annealing: Silakan sesuaikan dengan panjang primer dan gen target.

b) Akuisisi sinyal fluoresensi (★): Silakan atur prosedur eksperimental sesuai dengan persyaratan dalam petunjuk penggunaan instrumen.

c) Kurva leleh: Program default instrumen dapat digunakan secara normal.

3. Analisis Hasil 

Minimal tiga ulangan biologis diperlukan untuk percobaan kuantitatif.Setelah reaksi, kurva amplifikasi dan kurva leleh perlu dikonfirmasi.

3.1 Kurva amplifikasi:

Kurva amplifikasi standar berbentuk S.Analisis kuantitatif paling akurat bila nilai Ct berada di antara 20 dan 30. Jika nilai Ct kurang dari 10, templat perlu diencerkan dan dilakukan pengujian lagi.Bila nilai Ct antara 30-35, maka perlu dilakukan peningkatan konsentrasi template atau volume sistem reaksi, sehingga dapat meningkatkan efisiensi amplifikasi dan menjamin keakuratan analisis hasil.Jika nilai Ct lebih besar dari 35, maka hasil pengujian tidak dapat menganalisis ekspresi gen secara kuantitatif, tetapi dapat digunakan untuk analisis kualitatif.

3.2 Kurva leleh:

Puncak tunggal kurva leleh menunjukkan bahwa spesifisitas reaksi baik dan analisis kuantitatif dapat dilakukan;jika kurva leleh menunjukkan dua atau beberapa puncak, analisis kuantitatif tidak dapat dilakukan.Kurva leleh menunjukkan puncak ganda, dan perlu untuk menilai apakah puncak non-target adalah dimer primer atau amplifikasi non-spesifik dengan elektroforesis gel DNA agarosa.Jika itu adalah dimer primer, disarankan untuk mengurangi konsentrasi primer atau mendesain ulang primer dengan efisiensi amplifikasi yang tinggi.Jika amplifikasi non-spesifik, harap naikkan suhu anil, atau desain ulang primer dengan spesifisitas.

Catatan

Harap kenakan APD yang diperlukan, seperti jas lab dan sarung tangan, untuk memastikan kesehatan dan keselamatan Anda!

Produk ini HANYA untuk penggunaan penelitian!