Polimerase DNA Taq Liar
Taq DNA Polymerase adalah DNA polimerase termostabil dari Thermus Aquaticus YT-1, yang memiliki aktivitas polimerase 5′→3′ dan aktivitas endonuklease flap 5´.
Komponen
| Komponen | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Penyangga Taq | 2×1 ml | 2×10 mL | 2×50 mL | 5×200ml |
| Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5ml | 5×10 mL |
Kondisi penyimpanan
Transportasi di bawah 0°C dan disimpan pada -25°C~-15°C.
Definisi Satuan
Satu unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 15 nmol dNTP ke dalam bahan tidak larut asam dalam 30 menit pada suhu 75°C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kemurnian Protein (SDS-PAGE):Kemurnian DNA polimerase Taq ≥95% ditentukan dengan analisis SDS-PAGE.
2.EndAktivitas onuklease:Minimal 5 U Taq DNA polimerase dengan 1 μg λDNA selama 16 jam pada suhu 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
3.Aktivitas Eksonuklease:Minimal 5 U Taq DNA polimerase dengan 1 μg λ -Hind Ⅲ mencerna DNA selama 16 jam pada suhu 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
4.Aktivitas Nickase:Minimal 5 U Taq DNA polimerase dengan 1 μg pBR322 DNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
5.Aktivitas RNase:Minimal 5 U Taq DNA polimerase dengan 1,6 μg MS2 RNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
6.E.coliDNA:5 U DNA polimerase Taq disaring untuk mengetahui keberadaan DNA genom E. coli menggunakan TaqMan qPCR dengan primer spesifik untuk lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminasi DNA genom E.coli adalah ≤1 Salinan.
7.Amplifikasi PCR (DNA Lambda 5,0 kb)- Reaksi 50 µL yang mengandung 5 ng DNA Lambda dengan 5 unit Taq DNA Polymerase selama 25 siklus amplifikasi PCR menghasilkan produk 5,0 kb yang diharapkan.
Pengaturan Reaksi
| Komponen | Volume |
| Templat DNAa | opsional |
| Primer Maju 10 μM | 1 μL |
| Primer Terbalik 10 μM | 1 μL |
| Campuran dNTP (masing-masing 10mM) | 1 μL |
| 10×Taq Penyangga | 5 μL |
| Taq DNA PolimeraseB | 0,25 μL |
| Air bebas nuklir | Hingga 50 μL |
Catatan:
1) Konsentrasi reaksi optimal dari berbagai templat berbeda-beda.Tabel berikut menunjukkan penggunaan templat yang direkomendasikan untuk sistem reaksi 50 µL.
| DNA | Jumlah |
| Genomik | 1 ng-1 mcg |
| Plasmid atau Virus | 1 hal-1 ng |
2) Konsentrasi optimal Taq DNA Polymerase dapat berkisar antara 0,25 µL~1 µL dalam aplikasi khusus.
ReaksiProgram
| Melangkah | Suhu(°C) | Waktu | Siklus |
| Denaturasi awala | 95℃ | 5 menit | - |
| Denaturasi | 95℃ | 15-30 detik | 30-35 Siklus |
| anilB | 60℃ | 15 detik | |
| Perpanjangan | 72℃ | 1kb/menit | |
| Perpanjangan Terakhir | 72℃ | 5 menit | - |
Catatan:
1) Kondisi denaturasi awal cocok untuk sebagian besar reaksi amplifikasi dan dapat dimodifikasi sesuai dengan kompleksitas struktur templat.Jika struktur templatnya rumit, waktu pra-denaturasi dapat diperpanjang hingga 5 – 10 menit untuk meningkatkan efek denaturasi awal.
2) Suhu anil perlu disesuaikan dengan nilai Tm primer, yang umumnya ditetapkan 3~5℃ lebih rendah dari nilai Tm primer;Untuk templat yang kompleks, perlu untuk menyesuaikan suhu anil dan memperpanjang waktu perpanjangan untuk mencapai amplifikasi yang efisien.
