Superstart qPCR Premix plus-UNG
Nomor Kucing: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG adalah reagen khusus yang dirancang untuk reaksi kualitatif dan kuantitatif PCR Waktu Nyata menggunakan deteksi berbasis probe, yang dikembangkan secara khusus untuk proses liofilisasi.Ini mengandung enzim hot-start baru Hotstart Taq plus (DG), yang aktivitas enzim Taq-nya disegel pada suhu kamar, secara efektif menghambat amplifikasi non-spesifik yang disebabkan oleh anil non-spesifik primer atau pembentukan dimer primer dalam kondisi suhu rendah, sehingga meningkatkan kekhususan reaksi amplifikasi.Reagen ini menggunakan buffer spesifik qPCR yang dioptimalkan dan sistem anti-kontaminasi UNG/dUTP untuk mencapai penyalaan panas yang cepat, sehingga sangat meningkatkan efisiensi dan sensitivitas reaksi qPCR.Ia dapat memperoleh kurva standar yang baik di berbagai area kuantisasi dan melakukan kuantisasi secara akurat, secara efektif mencegah amplifikasi positif palsu yang disebabkan oleh sisa produk PCR atau kontaminasi aerosol.Reagen ini kompatibel dengan sebagian besar instrumen PCR kuantitatif fluoresen dari produsen seperti Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad dan Roche dll., dan menunjukkan stabilitas yang baik dalam bentuk liofilisasi.
Komposisi reagen
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (Ditjen)
2. 250 mM MgCl22
3. 4×lyoprotektan (opsional)
Kondisi penyimpanan
Penyimpanan jangka panjang pada -20℃;dapat disimpan pada suhu 4℃ hingga 3 bulan.Aduk rata sebelum digunakan danhindari pembekuan dan pencairan berulang kali.
Protokol Bersepeda
| Prosedur | Suhu. | Waktu | Siklus |
| Pencernaan | 50℃ | 2 menit | 1 |
| Aktivasi polimerase | 95℃ | 1~5 menit | 1 |
| Mengubah sifat sesuatu benda | 95℃ | 10~20 detik | 40-50 |
| Annealing dan Ekstensi | 56~64℃ | 20~60 detik | 40-50 |
qPCR Reaksi Cair SyPersiapan batang
|
Komposisi |
Volume 25µL |
Volume 50µL |
Konsentrasi Akhir |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+gratis) (Ditjen) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0,45µL | 0,9µL | 4,5mm |
| 4×lioprotektan1 | 6,25µL | 12,5µL | 1× |
| Campuran Probe Primer 25×2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Templat DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Sampai 25µL | Sampai 50µL | —— |
1. Konsentrasi akhir 0,2μM untuk primer biasanya memberikan hasil yang baik;ketika kinerja reaksi buruk, sesuaikan konsentrasi primer dalam kisaran 0,2-1μM sesuai kebutuhan.Konsentrasi probe biasanya dioptimalkan dalam kisaran 0,1-0,3μM melalui eksperimen gradien untuk menemukan kombinasi optimal.
2. Jumlah salinan gen target yang terkandung dalam berbagai jenis templat bervariasi;jika perlu, pengenceran gradien dapat dilakukan untuk menentukan jumlah penambahan templat yang optimal.
3. Sistem ini dapat diliofilisasi;ketika pelanggan menggunakan sistem ini tanpa persyaratan pengeringan beku, 4×lyoprotektan dapat ditambahkan secara selektif; jika ada produk kering beku yang diperlukan, selama validasi kinerja produk tahap reagen cair, harus menambahkan 4×lyoprotektan untuk memastikan konsistensi dengan komponen sistem terliofilisasi dan efek.
Saat sistem digunakand untuk pengeringan beku, siapkan sistem as mengikuti:
| Komposisi | 25μL Sistem Reaksi |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (Ditjen) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0,45µL |
| 4×lioprotektan | 6,25µL |
| Campuran Probe Primer 25× | 1µL |
| ddH2O | Sampai 18~20µL |
* Jika diperlukan sistem pengeringan beku lainnya, silakan berkonsultasi secara terpisah.
Proses Liofilisasiss
| Prosedur | Suhu. | Waktu | Kondisi | Tekanan |
| Pra-pembekuan | 4℃ | 30 menit | Memegang |
1 atm |
| -50℃ | 60 menit | Pendinginan | ||
| -50℃ | 180 menit | Memegang | ||
| Pengeringan Primer | -30℃ | 60 menit | Pemanasan |
Vakum Tertinggi |
| -30℃ | 70 menit | Memegang | ||
| Pengeringan Sekunder | 25℃ | 60 menit | Pemanasan |
Vakum Tertinggi |
| 25℃ | 300 menit | Memegang |
2. Proses liofilisasi di atas hanya untuk referensi.Jenis produk yang berbeda dan pengering beku yang berbeda memiliki parameter yang berbeda, sehingga penyesuaian dapat dilakukan sesuai dengan keadaan sebenarnyakondisi saat digunakan.
3. Proses liofilisasi yang berbeda mungkin cocok untuk ukuran batch liofilisasi yang berbedaproduk, jadi validasi pengujian yang memadai harus dilakukan saat digunakan untuk produksi skala besar.
Petunjuk penggunaan lyophilized bubuk
1. Sentrifugasi sebentar bubuk lyophilized;
2. Tambahkan templat asam nukleat ke bubuk terliofilisasi dan tambahkan air hingga 25µL;
3. Aduk rata dengan sentrifugasi dan jalankan pada mesin.
Kontrol kualitas:
1. Pengujian fungsional: sensitivitas, spesifisitas, reproduktifitas qPCR.
2. Tidak ada aktivitas nuklease eksogen, tidak ada kontaminasi endo/eksonuklease eksogen.
Informasi Teknis:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG menggunakan enzim hot-start baru yang memungkinkan hot-start cepat dalam 1~5 menit;melalui formulasi buffer khusus, sangat cocok untuk reaksi PCR kuantitatif fluoresen multipleks.
2. Ini memiliki spesifisitas lebih tinggi yang secara signifikan meningkatkan sensitivitas deteksi batas PCR kuantitatif fluoresensi, membuat normalisasi kurva amplifikasi, nilai fluoresensi memperoleh peningkatan yang jelas pada templat konsentrasi rendah, cocok sebagai reagen deteksi PCR kuantitatif fluoresensi sensitivitas tinggi.
3. Untuk primer dengan suhu anil lebih rendah atau fragmen lebih panjang dari 200bp, disarankan metode 3 langkah.
4. Efisiensi pemanfaatan dUTP dan sensitivitas terhadap enzim UNG berbeda untuk gen target yang berbeda, sehingga jika penggunaan sistem UNG menyebabkan penurunan sensitivitas deteksi, sistem reaksi harus disesuaikan dan dioptimalkan.Jika dukungan teknis diperlukan, silakan hubungi perusahaan kami.
5. Gunakan area dan pipet khusus sebelum dan sesudah amplifikasi, kenakan sarung tangan selama pengoperasian dan sering-seringlah menggantinya;jangan membuka tabung reaksi setelah PCR selesai untuk meminimalkan kontaminasi sampel oleh produk PCR.
