Inhibitor Rnase (Bebas gliserol)
Inhibitor murine RNase adalah inhibitor murine RNase rekombinan yang diekspresikan dan dimurnikan dari E.coli.Ia mengikat RNase A, B atau C dalam rasio 1:1 melalui ikatan non-kovalen, sehingga menghambat aktivitas ketiga enzim dan melindungi RNA dari degradasi.Namun, ini tidak efektif melawan RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H atau RNase dari Aspergillus.Inhibitor Murine RNase diuji dengan RT-PCR, RT-qPCR dan IVT mRNA, dan kompatibel dengan berbagai reverse transkriptase komersial, DNA polimerase, dan RNA polimerase.
Dibandingkan dengan inhibitor RNase manusia, inhibitor RNase murine tidak mengandung dua sistein yang sangat sensitif terhadap oksidasi yang menyebabkan inaktivasi inhibitor.Sehingga membuatnya stabil pada konsentrasi DTT yang rendah (kurang dari 1 mM).Fitur ini membuatnya cocok untuk digunakan dalam reaksi dimana konsentrasi DTT yang tinggi merugikan reaksi (misalnya RT-PCR waktu nyata).
Aaplikasi
Produk ini dapat digunakan secara luas dalam eksperimen apa pun yang memungkinkan interferensi RNase untuk menghindari degradasi RNA, seperti:
1. Sintesis cDNA untai pertama, RT-PCR, RT-qPCR, dll.;
2.Melindungi RNA dari degradasi transkripsi/translasi in-vitro (misalnya replikasi virus in vitro);
3. Penghambatan aktivitas RNase selama isolasi dan pemurnian RNA.
Kondisi penyimpanan
Simpan pada suhu -25～-15℃;
Siklus beku-cair ≤ 5 kali;
Berlaku selama 1 tahun.
Definisi satuan
Satu unit didefinisikan sebagai jumlah RNase Inhibitor yang diperlukan untuk menghambat aktivitas 5 ng RNase A sebesar 50%.
Berat molekul
RNase Inhibitor (Bebas gliserol) adalah protein 50 kDa.
Kontrol kualitas
Eksonuklease Aktivitas:
Inkubasi 40 U enzim dengan 1 μg λ-Hind III mencerna DNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi DNA yang terdeteksi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel.
Aktivitas Endonuklease:
Inkubasi 40 U enzim dengan 1 μg λ DNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi DNA yang terdeteksi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel.
Menjilat Aktivitas:
Inkubasi 40 U enzim dengan 1 μg pBR322 selama 16 jam pada suhu 37℃ tidak menghasilkan degradasi DNA yang terdeteksi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel.
RNase Aktivitas:
Inkubasi 40 U enzim dengan 1,6 μg MS2 RNA selama 4 jam pada suhu 37℃ tidak menghasilkan degradasi RNA yang terdeteksi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel.
E.DNA E.coli:
40 U Enzim terdeteksi oleh TaqMan qPCR.DNA E.coli adalah ≤ 0,1pg/40U.
Ncatatans
1.Jangan dikocok atau diaduk dengan keras untuk mencegah inaktivasi enzim.
2.RNase inhibitor aktif pada suhu berkisar antara 25℃ hingga 55℃ dan dinonaktifkan pada ≥65℃.
3. Aktivitas RNase H, RNase 1, dan RNase T1 tidak terhambat.
4. Kisaran pH untuk menghambat aktivitas RNase sangat luas (aktif pada pH 5-9), menunjukkan aktivitas maksimum pada pH 7-8.
