Mulai panas Taq DNA Polimerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Modifikasi antibodi) adalah DNA polimerase termostabil hot-start dari Thermus Aquaticus YT-1, yang memiliki aktivitas polimerase 5′→3′ dan aktivitas endonuklease flap 5´.Polimerase DNA Taq yang panas adalah DNA polimerase Taq yang dimodifikasi oleh antibodi Taq yang termolabil.Modifikasi antibodi meningkatkan spesifisitas, sensitivitas, dan hasil PCR.
Komponen
| Komponen | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| Penyangga Taq 5×HC | 4×1 mL | 4×10 mL | 4×50ml | 5×400ml |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibodi dimodifikasi) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5ml | 10x5ml |
Aplikasi
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 pada 25℃), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 dan 50% Gliserol.
Kondisi penyimpanan
Transportasi di bawah 0°C dan disimpan pada -25°C~-15°C.
Definisi Satuan
Satu unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 15 nmol dNTP ke dalam bahan tidak larut asam dalam 30 menit pada suhu 75°C.
Kontrol kualitas
1.EndAktivitas onuklease:Inkubasi 20 U enzim dengan 4 μg DNA pUC19 selama 4 jam pada suhu 37℃ tidak menghasilkan degradasi DNA yang terdeteksi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel.
2.PCR Lambda 5 kb:25 Siklus amplifikasi PCR dari 5 ng DNA Lambda dengan 1,25 unit Taq DNA Polymerase dengan adanya 200 µM dNTP dan 0,2 µM primer menghasilkan produk 5 kb yang diharapkan.
3.Aktivitas Eksonuklease:Inkubasi reaksi 50 μl yang mengandung minimal 12,5 U Taq DNA Polymerase dengan 10 nmol 5´-FAM oligonukleotida selama 30 menit pada suhu 37℃ tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi.
4.Aktivitas RNase:Inkubasi 10 μL reaksi yang mengandung 20 U enzim dengan 1 μg transkrip RNA selama 2 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi RNA yang terdeteksi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel.
5.Inaktivasi Panas:TIDAK.
Sistem Reaksi
| Komponen | Volume |
| Templat DNAa | opsional |
| Primer Maju 10 μM | 0,5 μL |
| Primer Terbalik 10 μM | 0,5 μL |
| Campuran dNTP (masing-masing 10mM) | 0,5 μL |
| Penyangga Taq 5×HC | 5 μL |
| Taq DNA PolimeraseB(5U/μL) | 0,125 μL |
| Air bebas nuklir | Hingga 25 μL |
Catatan:
1) sebuah.
| DNA | Jumlah |
| Genomik | 1 ng-1 mcg |
| Plasmid atau Virus | 1 hal-1 ng |
2) dgn B.Konsentrasi optimal Taq DNA Polymerase dapat berkisar antara 5-50 unit/mL (0,1-0,5 unit/25 µL reaksi) dalam aplikasi khusus.
Protokol siklus termal
PCR
| Melangkah | Suhu(°C) | Waktu | Siklus |
| Denaturasi awala | 95℃ | 1-3 menit | - |
| Denaturasi | 95℃ | 15-30 detik | 30-35 Siklus |
| anilB | 45-68℃ | 15-60 detik | |
| Perpanjangan | 68℃ | 1kb/menit | |
| Perpanjangan Terakhir | 68℃ | 5 menit | - |
Catatan:
1) Denaturasi awal 1 menit pada suhu 95°C sudah cukup untuk sebagian besar amplifikasi.Untuk templat yang sulit, disarankan denaturasi yang lebih lama yaitu 2-3 menit pada suhu 95°C.Dengan PCR koloni, direkomendasikan denaturasi awal selama 5 menit pada suhu 95°C.
2) Langkah anil biasanya 15-60 detik.Suhu anil didasarkan pada Tm pasangan primer dan biasanya 45-68℃.
