Enzim UDG/UNG
UDG (urasil DNA glikosilase) dapat mengkatalisis hidrolisis ikatan N-glikosidik antara basa urasil dan tulang punggung gula-fosfat dalam ssDNA dan dsDNA.Ini dapat dengan mudah mengendalikan polusi aerosol dan cocok untuk sistem biologi molekuler umum seperti PCR, qPCR, RT-qPCR, dan LAMP.
Spesifikasi
| Tuan Rumah Ekspresi | E. coli rekombinan dengan gen glikosilase DNA urasil |
| Berat molekul | 24.8kDa |
| Kemurnian | ≥95% (SDS-HALAMAN) |
| Inaktivasi Panas | 95℃, 5~10 menit |
| Definisi Satuan | Satu unit (U) didefinisikan sebagai jumlah enzim yang diperlukan untuk mengkatalisis hidrolisis l μg dU dsDNA yang mengandung dalam 30 menit pada suhu 25℃. |
Penyimpanan
Produk harus disimpan pada suhu -25℃~-15°C selama dua tahun.
instruksi
1.Persiapan campuran reaksi PCR menurut sistem berikut
| Komponen | Volume (µL) | Konsentrasi akhir |
| 10×Penyangga PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/lindi |
| Templat DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 mol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 mol/L |
| Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 0.5 | 0,05 U/μL |
| Glikosilase DNA Urasil (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Hingga 50 | - |
Catatan: Menurut persyaratan percobaan, konsentrasi akhir dUTP dapat disesuaikan antara 0,2-0,6 mmol/L, dan 0,2 mmol/L dTTP dapat ditambahkan secara selektif.
2.Prosedur amplifikasi
| Langkah siklus | Suhu | Waktu | Siklus |
| degradasi template yang mengandung dU | 25℃ | 10 menit | 1 |
| Aktivasi UDG, denaturasi awal templat | 95℃ | 5~10 menit | 1 |
| Denaturasi | 95℃ | 10 detik |
30-35 |
| anil | 60℃ | 20 detik | |
| Perpanjangan | 72℃ | 30 detik/kb | |
| Perpanjangan terakhir | 72℃ | 5 menit | 1 |
Catatan: Waktu reaksi pada 25°C dapat disesuaikan dalam 5-10 menit sesuai dengan persyaratan eksperimen.
Catatan
1.UDG aktif di sebagian besar buffer reaksi PCR.
2.Enzim harus disimpan dalam lemari es atau penangas es saat digunakan, dan harus disimpan pada suhu -20°C segera setelah digunakan.
3.Harap kenakan APD yang diperlukan, seperti jas lab dan sarung tangan, untuk memastikan kesehatan dan keselamatan Anda!
