Polimerase DNA Taq yang kuat
Robustart Taq DNA Polymerase adalah DNA polimerase awal yang panas.Produk ini tidak hanya dapat menghambat dengan lebih baik reaksi non-spesifik yang disebabkan oleh anil non-spesifik primer atau agregasi primer dalam proses persiapan dan amplifikasi sistem PCR.Oleh karena itu, ia memiliki spesifisitas yang sangat baik dan lebih efektif untuk amplifikasi templat konsentrasi rendah, dan cocok untuk reaksi amplifikasi PCR multipleks.Selain itu, produk ini memiliki penerapan yang sangat baik, dan hasil amplifikasi yang stabil dapat diperoleh dalam berbagai jenis reaksi PCR.
Komponen
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ gratis) (opsional)
3.25 mM MgCl22(opsional)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ gratis) tidak mengandung dNTP dan Mg²+, harap tambahkan dNTPs dan MgCl2saat menyiapkan sistem reaksi.
Aplikasi yang Direkomendasikan
1.Amplifikasi cepat.
2.Amplifikasi ganda.
3.Amplifikasi langsung darah, penyeka, dan sampel lainnya.
4.Deteksi penyakit pernafasan.
Kondisi penyimpanan
-20°C untuk penyimpanan jangka panjang, harus dicampur dengan baik sebelum digunakan, hindari sering dibekukan-dicairkan.
*Jika presipitasi terjadi setelah pendinginan, itu normal;disarankan untuk menyeimbangkannya pada suhu kamar sebelum dicampur dan digunakan.
Definisi Satuan
Satu unit aktif (U) didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 10 nmol deoksiribonukleotida ke dalam bahan tidak larut asam pada suhu 74°C selama 30 menit menggunakan DNA sperma salmon teraktivasi sebagai cetakan/primer.
Kontrol kualitas
1.Kemurnian elektroforesis SDS-PAGE lebih besar dari 98%.
2.Sensitivitas amplifikasi, kontrol batch-ke-batch, stabilitas.
3.Tidak ada aktivitas nuklease eksogen, tidak ada kontaminasi endonuklease atau eksonuklease eksogen
instruksi
Pengaturan Reaksi
| Komponen | Volume (μL) | Konsentrasi Akhir |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ gratis)a | 5 | 1× |
| dNTP (10mM setiap dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl22 | 2-8 | 1-4mm |
| Robustart Taq DNA Polimerase (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Campuran primerB | 2 | 1× |
| Templat | - | ＜ 1 μg/reaksi |
| ddH2O | Sampai 50 | - |
Catatan:
1) sebuah.Buffer tidak mengandung dNTP dan Mg²+, harap tambahkan dNTPs dan MgCl2saat menyiapkan sistem reaksi.
2) dgn B.Jika digunakan untuk qPCR/qRT-PCR, probe fluoresen harus ditambahkan ke sistem reaksi.Biasanya, konsentrasi primer akhir sebesar 0,2 μM akan memberikan hasil yang baik;jika kinerja reaksi buruk, konsentrasi primer dapat disesuaikan dalam kisaran 0,2-1 μM.Konsentrasi probe biasanya dioptimalkan dalam kisaran 0,1-0,3 μM.Eksperimen gradien konsentrasi dapat dilakukan untuk menemukan kombinasi primer dan probe terbaik.
Protokol siklus termal
| PCR biasaproses | |||
| Melangkah | Suhu | Waktu | Siklus |
| Pra-denaturasi | 95℃ | 1-5 menit | 1 |
| Denaturasi | 95℃ | 10-20 detik | 40-50 |
| Anil / Ekstensi | 56-64℃ | 20-60 detik | |
| PCR cepatproses | |||
| Melangkah | Suhu | Waktu | Siklus |
| Pra-denaturasi | 95℃ | 30 detik | 1 |
| Denaturasi | 95℃ | 1-5 detik | 40-45 |
| Anil / Ekstensi | 56-64℃ | 5-20 detik | |
Catatan
1.Laju amplifikasi DNA polimerase cepat tidak boleh kurang dari 1 kb/10 detik.Laju kenaikan dan penurunan suhu, mode kontrol suhu, dan efisiensi konduksi panas pada instrumen PCR yang berbeda sangat bervariasi, sehingga disarankan untuk mengoptimalkan kondisi reaksi optimal untuk instrumen PCR cepat tertentu.
2.Sistem ini sangat mudah beradaptasi, dengan spesifisitas dan sensitivitas yang lebih tinggi.
3.Cocok untuk digunakan sebagai reagen pendeteksi PCR sensitivitas tinggi, dan dapat digunakan dalam reaksi amplifikasi PCR multipleks.
4.5′→3′ aktivitas polimerase, 5′→3′ aktivitas eksonuklease;tidak ada aktivitas eksonuklease 3′→5′;tidak ada fungsi koreksi.
5.Cocok untuk pengujian kualitatif dan kuantitatif PCR dan RT-PCR.
6.Ujung 3′ produk PCR adalah A, yang dapat langsung diklon menjadi vektor T.
7.Metode tiga langkah direkomendasikan untuk primer dengan suhu anil rendah atau untuk amplifikasi fragmen yang lebih panjang dari 200 bp.
