Rnase A
Ribonuklease A (RNaseA) adalah polipeptida untai tunggal yang mengandung 4 ikatan disulfida dengan berat molekul sekitar 13,7 kDa.RNase A adalah endoribonuklease yang secara khusus mendegradasi RNA untai tunggal pada residu C dan U.Secara khusus, pembelahan tersebut mengenali ikatan fosfodiester yang dibentuk oleh 5′-ribosa suatu nukleotida dan gugus fosfat pada 3′-ribosa dari nukleotida pirimidin yang berdekatan, sehingga 2, 3′-siklik fosfat dihidrolisis menjadi 3 yang sesuai. ′nukleosida fosfat (misalnya pG-pG-pC-pA-pG dibelah oleh RNase A untuk menghasilkan pG-pG-pCp dan A-PG).RNase A adalah yang paling aktif dalam membelah RNA beruntai tunggal.Konsentrasi kerja yang disarankan adalah 1-100μG/mL, kompatibel dengan berbagai sistem reaksi.Konsentrasi garam rendah (0-100 mM NaCl) dapat digunakan untuk memotong RNA untai tunggal, RNA untai ganda, dan rantai RNA yang dibentuk oleh hibridisasi RNA-DNA.Namun, pada konsentrasi garam tinggi (≥0,3 M), RNase A hanya secara spesifik membelah RNA untai tunggal.
RNase A paling sering digunakan untuk menghilangkan RNA selama preparasi DNA plasmid atau DNA genom. Aktif atau tidaknya DNase selama proses preparasi dapat dengan mudah mempengaruhi reaksi.Metode tradisional yaitu merebus dalam penangas air dapat digunakan untuk menonaktifkan aktivitas DNase.Produk ini tidak mengandung DNase dan protease, dan tidak memerlukan perlakuan panas sebelum digunakan.Selain itu, produk ini juga dapat digunakan dalam eksperimen biologi molekuler seperti analisis proteksi RNase dan analisis sekuens RNA.
Kondisi penyimpanan
Produk dapat disimpan pada suhu -25～-15℃, berlaku selama 2 tahun.
instruksi
Ini adalah salah satu metode umum untuk menyiapkan larutan penyimpanan RNase A.Itu juga bisa disiapkan olehmetode lain sesuai dengan metode tradisional di laboratorium atau literatur referensi (sepertilangsung larut dalam 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 atau larutan Tris-NaCl)
1. Gunakan 10 mM natrium asetat (pH 5,2) untuk menyiapkan 10 mg/mL larutan penyimpanan RNase A
2. Pemanasan pada suhu 100 ℃ selama 15 menit
3. Dinginkan suhu ruang,tambahkan 1/10 volume 1 M Tris-HCl (pH 7,4), sesuaikan pH-nya menjadi 7,4 (untukMisalnya, tambahkan 500 ml larutan penyimpanan RNase 10g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sub-paket pada suhu -20℃ untuk penyimpanan beku, yang dapat stabil hingga 2 tahun.
[Catatan]: Saat merebus larutan RNaseA dalam kondisi netral, presipitasi RNase akan terbentuk;Rebus pada pH yang lebih rendah, dan jika terjadi pengendapan dapat diamati, yang mungkin disebabkan oleh adanya pengotor protein.Jika sedimen ditemukan setelah perebusan, kotoran dapat dihilangkan dengan sentrifugasi kecepatan tinggi (13000rpm), dan kemudian dikemas untuk penyimpanan beku.
Informasi produk
| Sinonim | Ribonuklease I;Ribonuklease pankreas;Ribonuklease 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| Nomer CAS. | 9001-99-4 |
| Penampilan | Bubuk terliofilisasi berwarna putih |
| Berat molekul | ~ 13.7kDa (urutan asam amino) |
| Nilai Ph | 7.6 (rentang aktivitas 6-10) |
| Suhu yang Cocok | 60℃ (Rentang aktivitas 15-70℃) |
| Agen pengaktif | Na2+.K+ |
| penghambat | Penghambat RNAse |
| Metode inaktivasi | Tidak dapat dinonaktifkan dengan pemanasan, disarankan menggunakan kolom centrifuge |
| Asal | Termasuk keluarga sapi |
| Kelarutan | Larut dalam air (10mg/ml) |
| Kerugian saat kering | ≤5,0% |
| Aktivitas enzim | ≥60 unit Kunitz/mg |
| Titik isoelektrik | 9.6 |
Catatan
Demi keselamatan dan kesehatan Anda, harap kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai untuk pengoperasian.
