Penghambat RNAse
Inhibitor murine RNase adalah inhibitor murine RNase rekombinan yang diekspresikan dan dimurnikan dari E.coli.Ia mengikat RNase A, B atau C dalam rasio 1:1 melalui ikatan non-kovalen, sehingga menghambat aktivitas ketiga enzim dan melindungi RNA dari degradasi.Namun, ini tidak efektif melawan RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H atau RNase dari Aspergillus.Inhibitor Murine RNase diuji dengan RT-PCR, RT-qPCR dan IVT mRNA, dan kompatibel dengan berbagai reverse transkriptase komersial, DNA polimerase, dan RNA polimerase.
Dibandingkan dengan inhibitor RNase manusia, inhibitor RNase murine tidak mengandung dua sistein yang sangat sensitif terhadap oksidasi yang menyebabkan inaktivasi inhibitor.Sehingga membuatnya stabil pada konsentrasi DTT yang rendah (kurang dari 1 mM).Fitur ini membuatnya cocok untuk digunakan dalam reaksi dimana konsentrasi DTT yang tinggi merugikan reaksi (misalnya RT-PCR waktu nyata).
Aaplikasi
Produk ini dapat digunakan secara luas dalam eksperimen apa pun yang memungkinkan interferensi RNase untuk menghindari degradasi RNA, seperti:
1.Sintesis untai pertama cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, dll.
2.Melindungi RNA dari degradasi selama transkripsi/translasi in vitro (misalnya, sistem replikasi virus in vitro).
3.Penghambatan aktivitas RNase selama pemisahan dan pemurnian RNA.
Kondisi penyimpanan
Produk dapat disimpan pada suhu -25～- 15 ℃, berlaku selama 2 tahun.
Penyangga penyimpanan
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT dan 50% gliserol.
Definisi satuan
Jumlah inhibitor murine RNase yang diperlukan untuk menghambat aktivitas 5ng ribonuklease A sebesar 50% didefinisikan sebagai satu unit (U).
Berat molekul protein
Berat molekul inhibitor murine RNase adalah 50 kDa.
Kontrol kualitas
Eksonuklease Aktivitas:
40 U inhibitor murine RNase dengan 1 μg λ -Hind III mencerna DNA pada 37℃ selama 16 jam tidak menghasilkan degradasi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel agarosa.
Aktivitas Endonuklease:
40 U inhibitor murine RNase dengan 1μg λ DNA pada 37℃ selama 16 jam tidak menghasilkan degradasi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel agarosa.
Menjilat Aktivitas:
40U inhibitor murine RNase dengan 1μg pBR322 pada 37℃ selama 16 jam tidak menghasilkan degradasi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel agarosa.
RNase Aktivitas:
40U inhibitor murine RNase dengan 1,6μg MS2 RNA selama 4 jam pada 37℃ tidak menghasilkan degradasi seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel agarosa.
E.DNA E.coli:
40 U inhibitor murine RNase disaring untuk mengetahui keberadaan DNA genom E. coli menggunakan TaqMan qPCR dengan primer spesifik untuk lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminasi DNA genom E. coli adalah ≤ 0,1 pg/40 U.
Ncatatans
1. Osilasi atau pengadukan yang hebat akan menyebabkan inaktivasi enzim.
2. Kisaran suhu optimal inhibitor ini adalah 25-55 ℃, dan dinonaktifkan pada 65 ℃ ke atas.
3.Aktivitas RNase H, RNase 1 dan RNase T1 tidak dihambat oleh inhibitor murine RNase.
4. Penghambatan aktivitas RNase ditemukan pada rentang pH yang luas (pH 5-9 semuanya aktif), dan aktivitas tertinggi diamati pada pH 7-8.
5. Karena ribonuklease biasanya mempertahankan aktivitas dalam kondisi denaturasi, kehati-hatian harus diberikan untuk menghindari denaturasi molekul Inhibitor RNase yang telah berkompleks dengan ribonuklease.Untuk mencegah pelepasan ribonuklease aktif, suhu lebih dari 50 °C dan konsentrasi urea atau bahan denaturasi lainnya yang tinggi harus dihindari.
