DNase I (Bebas RNAse)(5u/ul)
Nomor Kucing: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) adalah endodeoxyribonuclease yang dapat mencerna DNA beruntai tunggal atau ganda.Ia mengenali dan memutuskan ikatan fosfodiester untuk menghasilkan monodeoksinukleotida atau oligodeoksinukleotida untai tunggal atau ganda dengan gugus fosfat pada terminal 5' dan hidroksil pada terminal 3'.Aktivitas DNase I bergantung pada Ca2+dan dapat diaktifkan oleh ion logam divalen seperti Mn2+dan Zn2+.5 mm Ca2+melindungi enzim dari hidrolisis.Di hadapan Mg2+, enzim tersebut dapat secara acak mengenali dan membelah situs mana pun pada untaian DNA mana pun.Di hadapan Mn2+, untaian ganda DNA dapat dikenali dan dibelah secara bersamaan di tempat yang hampir sama untuk membentuk fragmen DNA ujung datar atau fragmen DNA ujung lengket dengan 1-2 nukleotida menonjol.
Komponen
| Nama | 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU |
| DNase I, bebas RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ml |
| Penyangga 10×DNase I | 1mL | 1mL | 5×1mL | 5 × 10 mL |
Kondisi penyimpanan
-25℃~-15℃ untuk penyimpanan;Transportasi di bawah kantong es.
instruksi
1. Siapkan larutan reaksi dalam tabung bebas RNase sesuai dengan proporsi di bawah ini:
| Komponen | Volume |
| RNA | X mg |
| 10 × Penyangga DNase I | 1μL |
| DNase I, bebas RNase (5U/μL) | 1 U per µg RNA① |
| ddH2O | Hingga 10μL |
Catatan: ①Hitung volume DNase I yang perlu ditambahkan berdasarkan jumlah RNA.
2. 37 ℃ selama 15 menit;
3. Tambahkan EDTA 0,5M ke konsentrasi akhir 2,5mM~5mM, dan panaskan pada 65℃ selama 10 menit untuk menghentikan reaksi.Sampel dapat langsung digunakan untuk reaksi selanjutnya seperti transkripsi balikpercobaan.
Definisi Satuan
Satu unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang dapat mendegradasi 1µg pBR322 secara sempurnaDNA dalam 10 menit pada 37℃.
Kontrol kualitas
RNAse:5U DNase I dengan 1,6µg MS2 RNA selama 4 jam pada suhu 37℃ tidak menghasilkan degradasi karenaditentukan dengan elektroforesis gel agarosa.
Catatan
1. Harap siapkan 0,5MEDTA sendiri.
2. Gunakan 1U DNase I per µg RNA.Namun jika RNA kurang dari 1µg, silakan gunakan 1U DNase I.
3. Silakan letakkan enzim di atas es selama pengoperasian.
