BspQI
BspQI dapat diekspresikan secara rekombinan dalam E. coli yang dapat mengenali situs tertentu dan diproduksi di bawah
BspQI, suatu endonuklease restriksi endonuklease restriksi IIs, berasal dari strain E. coli rekombinan yang membawa gen BspQI yang dikloning dan dimodifikasi dari Bacillus sphaericus.Ia dapat mengenali situs tertentu, dan urutan pengenalan serta situs pembelahan adalah sebagai berikut:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Fitur Produk
1. Aktivitas tinggi, Pencernaan cepat;
2. Aktivitas bintang rendah, memastikan pemotongan akurat seperti “pisau bedah”;
3. Tanpa BSA dan bebas asal hewan;
Sensitivitas Metilasi
Dsaya metilasi:Tidak peka;
Dcm metilasi:Tidak peka;
Metilasi CpG:Tidak peka;
Kondisi penyimpanan
Produk harus dikirim ≤ 0℃;Simpan pada kondisi -25~- 15℃.
Penyangga penyimpanan
20mM Tris-HCl, 0,1mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Albumin Rekombinan, 0,1% Trition X- 100 dan 50% gliserol (pH 7,0 @ 25°C).
Definisi Satuan
Satu unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang dibutuhkan untuk mencerna 1µg DNA kontrol internal dalam 1 jam pada suhu 50°C dalam total volume reaksi 50 μL.
Kontrol kualitas
Uji Kemurnian Protein (SDS-PAGE):Kemurnian BspQI ≥95% ditentukan dengan analisis SDS-PAGE.
RNAse:10U BspQI dengan 1,6μg MS2 RNA selama 4 jam pada 50℃ tidak menghasilkan degradasi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel agarosa.
Aktivitas DNase Non-Spesifik:10U BspQI dengan 1μg λ DNA pada 50℃ selama 16 jam, dibandingkan dengan 50℃ selama 1 jam, tidak menghasilkan kelebihan DNA sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel agarosa.
Ligasi dan Pemotongan Ulang:Setelah pencernaan 1 μg λDNA dengan 10U BspQI, fragmen DNA dapat diikat dengan T4 DNA ligase pada suhu 16ºC.Dan fragmen yang diikat ini dapat dipotong ulang dengan BspQI.
E.coli DNA: Deteksi qPCR TaqMan spesifik E. coli 16s rDNA menunjukkan bahwa residu genom E.coli ≤ 0,1pg/ul.
Residu protein inang:≤ 50 ppm
Bakteri Endotoksin: Uji LAL, menurut Chinese Pharmacopoeia IV edisi 2020, metode uji batas gel, aturan umum (1143).Kandungan endotoksin bakteri harus ≤10 EU/mg.
Sistem dan kondisi reaksi
| Komponen | Volume |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 mikrogram |
| 10 x Penyangga BspQ I | 5 μL |
| menambahkan H2O | Hingga 50 μL |
Kondisi reaksi：50℃, 1~ 16 jam.
Inaktivasi panas：80°C selama 20 menit.
Sistem dan kondisi reaksi yang direkomendasikan dapat memberikan efek pencernaan enzim yang relatif baik, yang hanya untuk referensi, silakan lihat hasil eksperimen untuk detailnya.
Aplikasi produk
Pembatasan pencernaan endonuklease, Kloning cepat.
Catatan
1. Volume enzim ≤ 1/10 volume reaksi.
2. Aktivitas bintang dapat terjadi bila konsentrasi gliserol lebih dari 5%.
3. Aktivitas pembelahan dapat terjadi bila Substrat berada di bawah rasio yang disarankan.
