Mulai Hangat Bst 2.0 DNA Polimerase (Bebas Gliserol)
Bst DNA polimerase V2 berasal dari Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, yang memiliki aktivitas DNA polimerase 5′→3′ dan aktivitas penggantian rantai yang kuat, tetapi tidak memiliki aktivitas eksonuklease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 idealnya cocok untuk perpindahan untai, LAMP amplifikasi isotermal (Amplifikasi isotermal yang dimediasi loop) dan pengurutan cepat.Bst DNA polimerase V2 adalah versi hot-start berdasarkan Bst DNA polimerase V2 (HC5005A) yang diperoleh dengan teknologi modifikasi reversibel, yang dapat menghambat aktivitas DNA polimerase pada suhu kamar, sehingga sistem reaksi dapat dioperasikan dan diformulasikan pada suhu kamar untuk mencegah non- -amplifikasi spesifik dan meningkatkan efisiensi reaksi, dan versi ini dapat diliofilisasi.Selain itu, aktivitasnya dilepaskan pada suhu tinggi, sehingga tidak diperlukan langkah aktivasi tersendiri.
Komponen
| Komponen | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polimerase V2 (Bebas gliserol)(8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| Penyangga 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2×1,5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mm) | 1,5 ml | 2×1,5 mL | 2×10 mL |
Aplikasi
1.Amplifikasi isotermal LAMPU
2.Reaksi perpindahan tunggal untai DNA
3.Urutan gen GC tinggi
4.Urutan DNA tingkat nanogram.
Kondisi penyimpanan
Transportasi di bawah 0°C dan disimpan pada -25°C~-15°C.
Definisi Satuan
Satu unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 25 nmol dNTP ke dalam bahan tidak larut asam dalam 30 menit pada suhu 65°C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kemurnian Protein (SDS-PAGE):Kemurnian Bst DNA polimerase V2 ≥99% ditentukan dengan analisis SDS-PAGE menggunakan deteksi Coomassie Blue.
2.EndonukleaseAktivitas:Inkubasi reaksi 50 μL yang mengandung minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg λDNA selama 16 jam pada suhu 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
3.Aktivitas Eksonuklease:Inkubasi reaksi 50 μL yang mengandung minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg λ -Hind Ⅲ mencerna DNA selama 16 jam pada suhu 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
4.Aktivitas Nickase:Inkubasi reaksi 50 μL yang mengandung minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg pBR322 DNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
5.Aktivitas RNase:Inkubasi reaksi 50 μL yang mengandung minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1,6 μg MS2 RNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
6.E.coliDNA:120 U DNA polimerase V2 Bst disaring untuk mengetahui keberadaan DNA genom E. coli menggunakan TaqMan qPCR dengan primer spesifik untuk lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminasi DNA genom E.coli adalah ≤1 Salinan.
Reaksi LAMPU
| Komponen | 25μL |
| Penyangga 10×HC Bst V2 | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mm) | 1,5 μL |
| dNTP (masing-masing 10mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Hijau (25×)a | 1,0 μL |
| Campuran primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Bebas Gliserol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Templat | × μL |
| ddH₂O | Hingga 25 μL |
Catatan:
1) sebuah.SYTOTM 16 Hijau (25×): Sesuai dengan kebutuhan percobaan, pewarna lain dapat digunakan sebagai pengganti;
2) dgn B.Campuran primer: diperoleh dengan mencampurkan 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB dan volume lainnya.
Reaksi dan Kondisi
1 × Buffer HC Bst V2, suhu inkubasi antara 60°C dan 65°C.
Inaktivasi Panas
80°C, 20 menit
