Ultra Nuklease
UltraNuclease adalah endonuklaase rekayasa genetika yang berasal dari Serratia marcescens, yang mampu mendegradasi DNA atau RNA, baik untai ganda atau tunggal, linier atau sirkular dalam berbagai kondisi, mendegradasi asam nukleat secara sempurna menjadi oligonukleotida 5'-monofosfat dengan panjang 3-5 basa .Setelah modifikasi rekayasa genetika, produk difermentasi, diekspresikan, dan dimurnikan dalam Escherichia coli (E. coli), yang mengurangi viskositas supernatan sel dan penelitian ilmiah lisat sel, tetapi juga meningkatkan efisiensi pemurnian dan penelitian fungsionalprotein.Ini juga dapat digunakan dalam terapi gen, pemurnian virus, produksi vaksin, industri farmasi protein dan polisakarida sebagai reagen penghilang asam nukleat residu inang.
Fitur Produk
Nomer CAS. | 9025-65-4 |
Nomor EC. | |
Berat molekul | 30kDa |
Titik isoelektrik | 6.85 |
Kemurnian Protein | ≥99%( SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
Aktivitas tertentu | ≥1.1×106U/mg |
Suhu Optimal | 37°C |
pH optimal | 8.0 |
Aktivitas Protease | negatif |
beban biologis | <10CFU/100.000U |
Protein Sel Inang Sisa | ≤10ppm |
Logam berat | ≤10ppm |
Endotoksin Bakteri | <0,25EU/1000U |
Penyangga Penyimpanan | 20mM Tris-HCl, pH 8,0, 2mM MgCl2 , 20mM NaCl 50% Gliserol |
Kondisi penyimpanan
Transportasi ≤0°C;-25~-15°C Penyimpanan, validitas 2 tahun (hindari pembekuan-pencairan).
Definisi Satuan
Jumlah enzim yang digunakan untuk mengubah nilai penyerapan △A260 sebesar 1,0 dalam waktu 30 menit pada suhu 37 °C, pH 8,0, setara dengan 37μg DNA sperma salmon yang dicerna dengan memotong oligonukleotida, didefinisikan sebagai unit aktif (U).
Kontrol kualitas
Protein Sel Inang Sisa: Paket ELISA
•Protease Residu: 250KU/mL UltraNuclease bereaksi dengan substrat selama 60 menit, tidak ada aktivitas yang terdeteksi.
•Endotoksin Bakteri: Uji LAL, Metode Uji Batas Gel Farmakope Republik Rakyat Tiongkok Volume 4 (Edisi 2020).Aturan Umum (1143).
•Beban biologis: Farmakope Republik Rakyat Tiongkok Volume 4 (Edisi 2020)— Umum
Aturan Uji Sterilitas (1101), Standar Nasional RRC, GB 4789.2-2016.
•Logam berat:ICP-AES, HJ776-2015.
Operasi
Aktivitas UltraNuclease terhambat secara signifikan ketika konsentrasi SDS lebih dari 0,1% atau EDTA
konsentrasinya lebih dari 1mM.Surfaktan Triton X-100, Tween 20 dan Tween 80 tidak berpengaruh pada nuklease
sifat ketika konsentrasinya di bawah 1,5%.
Operasi | Pengoperasian Optimal | Operasi yang Sah |
Suhu | 37℃ | 0-45℃ |
pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
mg2+ | 1-2mm | 1- 15mm |
DTT | 0- 100mM | >100mM |
2-Merkaptoetanol | 0- 100mM | >100mM |
Ion logam monovalen (Na+, K+ dst.) | 0-20mm | 0-200mM |
PO43- | 0- 10mm | 0- 100mM |
Penggunaan dan Dosis
• Menghilangkan asam nukleat eksogen dari produk vaksin, mengurangi risiko sisa toksisitas asam nukleat dan meningkatkan keamanan produk.
• Mengurangi viskositas cairan umpan yang disebabkan oleh asam nukleat, mempersingkat waktu pemrosesan dan meningkatkan hasil protein.
• Menghilangkan asam nukleat yang membungkus partikel (virus, badan inklusi, dll), yang kondusif
untuk pelepasan dan pemurnian partikel.
Tipe Eksperimental | Produksi Protein | Virus, Vaksin | Obat Sel |
Nomor Sel | Berat basah sel 1g (diresuspensi dengan buffer 10ml) | fermentasi 1L supernatan cair | budaya 1L |
Dosis Minimal | 250U | 100U | 100U |
Dosis yang Direkomendasikan | 2500U | 25000U | 5000U |
• Perlakuan nuklease dapat meningkatkan resolusi dan perolehan kembali sampel untuk kromatografi kolom, elektroforesis, dan analisis blotting.
• Dalam terapi gen, asam nukleat dihilangkan untuk memperoleh virus terkait adeno yang dimurnikan.