UNG Sensitif terhadap Suhu
UNG Sensitif Suhu (TS-UNG) diperoleh melalui ekspresi rekombinan pada E. coli.Enzim ini mengkatalisis pelepasan urasil bebas dari DNA untai tunggal dan ganda yang mengandung urasil dan tidak aktif melawan RNA.Dibandingkan dengan enzim UNG konvensional asal gen E. coli, enzim TS-UNG memiliki aktivitas lebih tinggi pada suhu rendah (20℃~37℃) dan sensitif terhadap suhu serta mudah dinonaktifkan (50℃), menghindari degradasi amplifikasi yang mengandung dUTP produk pada suhu kamar dengan aktivitas sisa yang mungkin tersisa setelah inaktivasi enzim UNG konvensional.Oleh karena itu, enzim TS-UNG tidak hanya cocok untuk reaksi pencegahan kontaminasi PCR, tetapi juga cocok dengan program amplifikasi RT-PCR dan dapat digunakan dalam reaksi pencegahan kontaminasi RT-PCR.
Aplikasi yang Direkomendasikan
Amplifikasi Pencegahan Kontaminasi
Kondisi penyimpanan
-20°C untuk penyimpanan jangka panjang, harus dicampur dengan baik sebelum digunakan, hindari sering dibekukan-dicairkan.
Penyangga penyimpanan
20 mM Tris-HCl (pH 7,5) , 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Penstabil, 50% Gliserol.
Definisi Satuan
Jumlah enzim yang diperlukan untuk mendegradasi 1µg DNA untai tunggal yang mengandung basa dU dalam 1 jam pada suhu 37°C adalah 1 unit aktivitas (U).
Kontrol kualitas
1.Kemurnian elektroforesis SDS-PAGE lebih besar dari 98%
2.Aktivitas degradasi, pengendalian batch-ke-batch, stabilitas
3.Tidak ada aktivitas nuklease eksogen, tidak ada kontaminasi endonuklease atau eksonuklease eksogen.
instruksi
| Komponen | Volume (µL) | Konsentrasi akhir |
| 10 × Buffer PCR (bebas dNTP, Mg²+bebas) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ganti dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl22 | 2-8 μL | 1-4mm |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 kamu |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| 25 × Campuran PrimerA | 2 | 1× |
| Templat | - | ＜1μg/reaksi |
| ddH₂O | Sampai 50 | - |
Catatan: a: Jika digunakan untuk qPCR/qRT-PCR, probe fluoresen harus ditambahkan ke dalam sistem reaksi.Biasanya konsentrasi primer akhir sebesar 0,2 μM dapat memberikan hasil yang baik;ketika kinerja reaksi buruk, konsentrasi primer dapat disesuaikan dalam kisaran 0,2-1 μM.Biasanya, konsentrasi probe dioptimalkan pada kisaran 0,1-0,3 μM.Eksperimen gradien konsentrasi dapat dilakukan untuk menemukan kombinasi primer dan probe terbaik.
Catatan
1.Suhu reaksi optimal enzim TS-UNG relatif rendah, dan dapat dioptimalkan pada kisaran 20℃~37℃, dosis enzim dan waktu reaksi dapat dioptimalkan pada kisaran 0,1~0,5 U, 5~ 10 menit;dan enzim dapat dinonaktifkan dalam proses transkripsi terbalik.
2.Sangat cocok untuk PCR dan RT-PCR untuk mencegah kontaminasi.
3.Hindari seringnya pembekuan-pencairan, dan jangan sampai terkena fluktuasi suhu yang besar.
4.Gen yang berbeda yang akan diamplifikasi memiliki efisiensi pemanfaatan dUTP dan sensitivitas terhadap enzim UNG yang berbeda, oleh karena itu, jika penggunaan sistem UNG menyebabkan penurunan sensitivitas deteksi, sistem reaksi harus disesuaikan dan dioptimalkan, jika Anda memerlukan dukungan teknis, silakan hubungi perusahaan kita.
