DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) adalah endodeoxyribonuclease yang dapat mencerna DNA beruntai tunggal atau ganda.Ia mengenali dan memutuskan ikatan fosfodiester untuk menghasilkan monodeoksinukleotida atau oligodeoksinukleotida beruntai tunggal atau ganda dengan gugus fosfat pada terminal 5′ dan hidroksil pada terminal 3′.Aktivitas DNase I bergantung pada Ca2+ dan dapat diaktifkan oleh ion logam divalen seperti Mn2+ dan Zn2+.5mM Ca2+ melindungi enzim dari hidrolisis.Dengan adanya Mg2+, enzim dapat secara acak mengenali dan membelah situs mana pun pada untai DNA mana pun.Dengan adanya Mn2+, untaian ganda DNA dapat dikenali secara bersamaan dan dibelah pada lokasi yang hampir sama membentuk fragmen DNA ujung datar atau fragmen DNA ujung lengket dengan 1-2 nukleotida menonjol.
Properti Produk
Bovine Pancreas DNase I diekspresikan dalam sistem ekspresi ragi dan dimurnikan.
Ckomponen
| Komponen | Volume | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, bebas RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| Penyangga 10×DNase I | 1mL | 1mL | 5× 1mL | 5× 10mL |
Transportasi dan Penyimpanan
1. Stabilitas Penyimpanan: – 15℃~-25℃ untuk penyimpanan;
2. Stabilitas Transportasi: Transportasi di bawah bongkahan es;
3. Disediakan dalam: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% gliserol, pH 7,6 pada 25℃ .
Definisi Satuan
Satu unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang dapat mendegradasi 1 µg DNA pBR322 secara sempurna dalam waktu 10 menit pada suhu 37°C.
Kontrol kualitas
RNAse:5U DNase I dengan 1,6 μg MS2 RNA selama 4 jam pada 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi sebagaimana ditentukan oleh elektroforesis gel agarosa.
Bakteri Endotoksin:Uji LAL, menurut Chinese Pharmacopoeia IV edisi 2020, metode uji batas gel, aturan umum (1143).Kandungan endotoksin bakteri harus ≤10 EU/mg.
Petunjuk Penggunaan
1.Siapkan larutan reaksi dalam tabung bebas RNase sesuai dengan proporsi di bawah ini:
| Komponen | Volume |
| RNA | X mikrog |
| 10 × Penyangga DNase I | 1 μL |
| DNase I, bebas RNase (5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Hingga 10 μL |
2,37 ℃ selama 15 menit;
3.Tambahkan buffer terminasi untuk menghentikan reaksi, dan panaskan pada suhu 65℃ selama 10 menit untuk menonaktifkan DNase I. Sampel dapat langsung digunakan untuk percobaan transkripsi berikutnya.
Catatan
1.Gunakan 1U DNase I per μg RNA, atau 1U DNase I untuk kurang dari 1μg RNA.
2.EDTA harus ditambahkan ke konsentrasi akhir 5 mM untuk melindungi RNA agar tidak terdegradasi selama inaktivasi enzim.
