Bst 2.0 DNA Polimerase (bebas gliserol)
Bst DNA polimerase V2 berasal dari Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, yang memiliki aktivitas DNA polimerase 5′→3′ dan aktivitas penggantian rantai yang kuat, tetapi tidak memiliki aktivitas eksonuklease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 idealnya cocok untuk perpindahan untai, LAMP amplifikasi isotermal (Amplifikasi isotermal yang dimediasi loop) dan pengurutan cepat.
Komponen
| Komponen | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (Bebas gliserol) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| Penyangga 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2×1,5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mm) | 1,5 ml | 2×1,5 mL | 2×10 mL |
Aplikasi
1.LAMP amplifikasi isotermal
2. Reaksi perpindahan tunggal untai DNA
3. Urutan gen GC tinggi
4. Urutan DNA tingkat nanogram.
Kondisi penyimpanan
Transportasi di bawah 0°C dan disimpan pada -25°C~-15°C.
Definisi Satuan
Satu unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 25 nmol dNTP ke dalam bahan tidak larut asam dalam 30 menit pada suhu 65°C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kemurnian Protein (SDS-PAGE):Kemurnian Bst DNA polimerase V2 ≥99% ditentukan dengan analisis SDS-PAGE menggunakan deteksi Coomassie Blue.
2.Aktivitas Eksonuklease:Inkubasi reaksi 50 μL yang mengandung minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg λ -Hind Ⅲ mencerna DNA selama 16 jam pada suhu 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
3.Aktivitas Nickase:Inkubasi reaksi 50 μL yang mengandung minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg pBR322 DNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
4.Aktivitas RNase:Inkubasi reaksi 50 μL yang mengandung minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1,6 μg MS2 RNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang terdeteksi seperti yang ditentukan.
5.DNA E.coli:120 U DNA polimerase V2 Bst disaring untuk mengetahui keberadaan DNA genom E. coli menggunakan TaqMan qPCR dengan primer spesifik untuk lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminasi DNA genom E.coli adalah ≤1 Salinan.
Reaksi LAMPU
| Komponen | 25μL |
| Penyangga 10×HC Bst V2 | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mm) | 1,5 μL |
| dNTP (masing-masing 10mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Hijau (25×)a | 1,0 μL |
| Campuran primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Bebas Gliserol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Templat | × μL |
| ddH₂O | Hingga 25 μL |
Catatan:
1) sebuah.SYTOTM 16 Hijau (25×): Sesuai dengan kebutuhan percobaan, pewarna lain dapat digunakan sebagai pengganti;
2) dgn B.Campuran primer: diperoleh dengan mencampurkan 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB dan volume lainnya.
Reaksi dan Kondisi
1 × Buffer HC Bst V2, suhu inkubasi antara 60°C dan 65°C.
Inaktivasi Panas
80 °C,20 menit
